人白介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒為我司的熱銷產(chǎn)品,近日,有客戶來電就人白介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒樣品收集 處理及保存方法提出咨詢,我司技術部整理分析如下：

樣品收集 處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激.使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管.收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離.

2）血漿-----EDTA 檸檬酸鹽 肝素血漿可用于檢測.1000×g離心30分鐘去除顆粒.

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物.

4）組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎.1000×g離心10分鐘,取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍.盡可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾.不要在37℃或更高的溫度加熱解凍.應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍.

操作步驟：

 1）使用前,將所有試劑充分混勻.不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差.

2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù).每個標準品和空白孔建議做復孔.每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔.標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi).

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔 加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi).立即加入50ul的生物素標記的抗體.蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時.

4）甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復此操作3次.如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘.

6）甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復此操作3次.如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.

7）每孔加入底物A B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘.避免光照.

8）取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果.

9）在450nm波長處測定各孔的OD值.

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