ELISA試劑盒有著準確性高 靈敏度高 特異性強的諸多優(yōu)點,在實驗室的應用已經(jīng)相當普及,絕大多數(shù)是用于檢測未知樣本中抗原的濃度.現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進口,數(shù)量繁多令人目不暇接,而且質(zhì)量也是參差不齊,那么我們怎樣才能選出最適用的產(chǎn)品呢？首先要根據(jù)我們所要檢測的分子進行檢測,除此以外也還有一些需要加以考量的因素,下面就為大家提供幾點參考.
ELISA試劑盒雖然有多種類型,不過它們都有一個共同特點,就是進行抗原捕獲.一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲.In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細胞進行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測.ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細胞,然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點.此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗.
如今檢測ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇.一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP）,而反應體系中添加有相應的底物（如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）.這種酶促反應生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計進行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶.酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結(jié)合.此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測 熒光檢測 化學發(fā)光或顯色法檢測等.
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,實際上有時候二者結(jié)合效果更好.例如,對于雙抗夾心法而言,用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助.多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原.
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性.其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素.盡管現(xiàn)在購買源自指定動物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認一下是否會產(chǎn)生交叉反應的問題.在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應.如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實驗特異性就會大打折扣.通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題.
