抗體(Antibody),又稱免疫球蛋白(Immunoglobulin,簡稱 Ig),是一種由B細胞分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌 病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細胞的細胞膜表面.那么你知道從哪幾方面去鑒定抗體嗎?
1 抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價.不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一.鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應 瓊脂擴散試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗等.常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較.如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定.
2 抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力.抗體的特異性高,它的識別能力就強.衡量特異性通常以交叉反應率來表示.交叉反應率可用競爭抑制試驗測定.以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應率.
交叉反應率=IC50時抗原濃度(Y)/ IC50近似抗原物質(zhì)的濃度(Z)X 100%
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好.
3 抗體的親和力 抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度.親和力的高低是由抗原分子的大小 抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的.有助于維持抗原抗體復合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵 疏水鍵 側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力 范德華力和空間斥力.親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在108~1010/mol,也有多達1014/mol.抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義.
抗血清的凍存
抗血清收獲后,加萬分之一的硫柳汞或萬分之二的疊氮鈉防腐,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,置-20℃以下的低溫保存,數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價無明顯變化.注意避免反復凍融.也可將抗血清冷凍干燥后保存.
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