免疫學是研究生物體對抗原物質免疫應答性及其方法的生物-醫(yī)學科學.免疫應答是機體對抗原刺激的反應,也是對抗原物質進行識別和排除的一種生物學過程.在免疫學中,IHC Western ELISA,三大實驗分別用于定位,定性和定量.
IHC(免疫組化Immunohistochemistry)
是融合了免疫學原理(抗原抗體特異性結合)和組織學技術(組織的取材 固定 包埋 切片 脫蠟 水化等),通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素 酶 金屬離子 同位素)顯色,來對組織(細胞)內抗原進行定位 定性及定量的研究(主要是定位).樣本是細胞或組織,要在顯微鏡下觀察結果,可能出現膜陽性 質陽性和核陽性.
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗Enzyme linked immunosorbent assay)
用到了免疫學原理和化學反應顯色,待測的樣品多是血清 血漿 尿液 細胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒有用到組織包埋 切片等技術,這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上 開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義.
WB (蛋白質印跡Western Blot)
先要進行SDS-PAGE,然后將分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標記物顯色來檢測樣品,可以用于定性和半定量.
對于IHC來說,定位是免疫組化最大的優(yōu)勢
該方法可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,這樣就可以進行形態(tài)與功能相結合的研究,相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準確 定性靈敏度高,是定位檢測分析首選方法對病理學領域開展深入研究是十分有意義,尤其對于有些因子的轉位研究十分有用.
WB與IHC技術相比,定量可能更加準確
當然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白 胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進而間接反映它們的定位),但敏感性遠遠低于IHC.
ELISA與免疫組化技術相比,定量最準確,是分泌性蛋白檢測首選方法之一.
尤其對于微定量分析多個樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結果精確.IHC針對性比較強,而且一般是以組織或者細胞為樣本,而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液.免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性,一般不用于定量檢測.
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