ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)非常嚴(yán)謹(jǐn)、極其考驗(yàn)操作者技巧和經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果數(shù)值低、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)梯度差、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問(wèn)題也是兵家常事。有很多客戶(hù)向我們咨詢(xún)，ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)總是偏低，不知道是什么問(wèn)題。恒遠(yuǎn)生物就為大家總結(jié)一下具體原因，一起來(lái)看看吧！
一、整體OD值偏低或無(wú)信號(hào)：
1.試劑盒組分失活
相應(yīng)對(duì)策：使用新的試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑盒
2.試劑盒組分未平衡
相應(yīng)對(duì)策：試劑盒每個(gè)組分都需要平衡至室溫后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
3.試劑混用或混合不充分
相應(yīng)對(duì)策：保證使用試劑盒內(nèi)完整一套試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證溶液充分混合
4.洗液被污染
相應(yīng)對(duì)策：配制新的洗液
5.洗滌液浸泡時(shí)間過(guò)久或洗板次數(shù)過(guò)多
相應(yīng)對(duì)策：按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作
6.孵育時(shí)間不充分
相應(yīng)對(duì)策：保證充足的孵育時(shí)間
7.孵育溫度不穩(wěn)定
相應(yīng)對(duì)策：檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定
8.生物素化抗體或HRP酶結(jié)合物不足
相應(yīng)對(duì)策：保證濃縮液取量準(zhǔn)確且稀釋完全
9.生物素化抗體或酶結(jié)合物稀釋不正確或步驟顛倒
相應(yīng)對(duì)策：按照說(shuō)明書(shū)的步驟和要求進(jìn)行操作
10. 未加終止液
相應(yīng)對(duì)策：反應(yīng)結(jié)束時(shí)，確保每孔加入終止液終止反應(yīng)
11.終止后未及時(shí)讀板
相應(yīng)對(duì)策：終止液終止反應(yīng)后需要在10min內(nèi)進(jìn)行讀板操作
12.酶標(biāo)儀設(shè)置錯(cuò)誤
相應(yīng)對(duì)策：在酶標(biāo)儀上檢查波長(zhǎng)和濾光片設(shè)置
二、標(biāo)曲線(xiàn)性佳但樣本OD值偏低
1.標(biāo)準(zhǔn)品部分降解
相應(yīng)對(duì)策：按照說(shuō)明書(shū)推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品。開(kāi)封后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以最高濃度用EP管分裝凍存，保存于-20℃，半個(gè)月內(nèi)使用有效。
2.標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)
相應(yīng)對(duì)策：打開(kāi)前將標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，檢查復(fù)溶后是否有未溶解的物質(zhì)
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確
相應(yīng)對(duì)策：按照說(shuō)明書(shū)要求，保證按正確倍比梯度稀釋
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