ELISA方法學(xué)在實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的很廣泛，5個(gè)實(shí)驗(yàn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)都是用ELISA法檢測(cè)的，對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)中也是有多種方法學(xué)可以選擇的，今天我們著重的講解下ELISA實(shí)驗(yàn)中競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗-HBe，先來(lái)了解一下實(shí)驗(yàn)原理吧！
一、實(shí)驗(yàn)原理
用抗-HBe包被固相載體后，同時(shí)加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HBeAg，被檢標(biāo)本中抗-HBe越多，HBeAg被結(jié)合越多，而與包被抗-HBe結(jié)合就越少，加底物后顯色就越淺；反之越深。
二、主要試劑與器材
ELISA試劑盒：內(nèi)含已包被抗-HBe板條、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清，底物溶液（A液、B液）、終止液、洗滌液。
三、結(jié)果分析
1.P/N≤0.3為陽(yáng)性。P/N＞0.3為陰性。
2.P/N=待檢血清OD值/陰性對(duì)照OD值。
四、注意事項(xiàng)
1.試劑置2-4℃保存。取用時(shí)應(yīng)先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮，zui好凍存，取用后余者及時(shí)封存。
2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度。
3.試劑用前應(yīng)搖勻。
五、操作步驟
1.加樣：取出干包板條，按編號(hào)順序分別加50μl待檢血清、陰性對(duì)照血清和陽(yáng)性對(duì)照血清于相應(yīng)孔中。設(shè)空白對(duì)照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振蕩混勻后，置43℃（或37℃）溫育1h。
2.洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20s，甩干。如此重復(fù)洗滌4次，在吸水紙上拍干。
3.顯色：每孔加顯色劑A、顯色劑B各50μl，振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min。
4.終止：每孔加終止液50μl，振蕩混勻。
5.酶標(biāo)儀檢測(cè)：選用450nm波長(zhǎng)，用空白孔調(diào)零之后測(cè)各孔OD值。
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