Xeno-Free人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號：Cat.No.:AC-1001003

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

Xeno-Free人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基是埃澤思生物（Applied Cell^TM）自主研發(fā)的一款無外源動物成分的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基�？蓱�用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)，并保持其多向分化潛能。GMP級別生產(chǎn)車間，嚴格執(zhí)行cGMP操作標準，各項指標優(yōu)于行業(yè)標準。

Xeno-Free人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機鹽、白蛋白，轉鐵蛋白、胰島素、微量元素，細胞因子等。 

產(chǎn)品特性

l 無外源動物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風險。

l 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異，避免實驗條件的重復摸索。

l 培養(yǎng)載體無需包被，直接培養(yǎng)。

l 擴增效率高，24h左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時間。

產(chǎn)品內(nèi)容

相關產(chǎn)品

Serum-Free細胞凍存液（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001005/1001006）

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人類脂肪間充質(zhì)干細胞（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001004）

實驗準備

人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基配制

1） 37℃快速解凍人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)，時間大致為10min。待添加劑融化后緩慢搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲存于-20℃至-80℃，避免反復凍融 。

2）將添加劑以10%比例加入到人類間充質(zhì)干細胞基礎培養(yǎng)基中，混勻，即為人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。

3）人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）可直接應用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)，具體操作方法及其他相關技術資料請參考埃澤思生物官網(wǎng)。

操作方法(以下步驟皆應在無菌條件下操作)

hMSC細胞復蘇(10cm dish)

1.  從液氮中取出凍存的hMSC細胞，迅速將凍存管放入37℃水浴快速融解。

2.在生物安全柜或超凈臺中，將解凍后的細胞懸液緩慢加入5 mL預溫的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。

3.300g 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）重懸細胞。

4.將細胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動培養(yǎng)皿使細胞均勻分布，5% CO₂的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后觀察細胞狀態(tài)。

5.第2天吸掉原來培養(yǎng)基，加入新鮮的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）繼續(xù)培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)液。

hMSC細胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到90%，即可傳代。

2.在超凈臺/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003），加入PBS溶液洗一次，加入人類間充質(zhì)干細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。

3.室溫孵育5-6分鐘或37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部細胞間出現(xiàn)間隙，停止消化。

4.加入與消化液2倍體積的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）中和消化，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。

5.將細胞懸液轉移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。

6.棄上清，加入人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003），重懸細胞，1：3-1：4傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 條件下培養(yǎng)。

注意：細胞傳代所需的時間：2-4天。5代及之前的細胞，生長速度較快。5代以后的細胞，生長速度稍緩。

hMSC細胞凍存

1.  細胞達到80-90%匯合度， 吸走舊的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003），并且加入PBS溶液清洗。

2.加入人類間充質(zhì)干細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育5-8分鐘或37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部細胞間出現(xiàn)間隙，停止消化。

3.加入與消化液2倍體積的人類間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（AC-1001003）中和消化，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散，將細胞懸液轉移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。

4.緩慢加入適量Serum-free細胞凍存液（AC-1001005/1001006），調(diào)整細胞密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。

5.輕輕地重懸細胞，將重懸均勻的細胞按等份加入到無菌凍存管（需提前做好標記）中，旋緊凍存管蓋 。

6.直接放入-80℃，一天或兩天后放入液氮中長期保存。

細胞形態(tài)圖

質(zhì)量控制