α-酮戊二酸（αKA）ELISA試劑盒

[商品編號(hào)]:HB099-SH

[CAS]：無(wú)

[英文名稱]：

[分子式]：

[分子量]：[品　　牌]：恒遠(yuǎn)生物

[庫(kù)　　存]： 500 盒

產(chǎn)品描述

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定樣本中α-酮戊二酸（αKA）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中α-酮戊二酸（αKA）水平。用純化的α-酮戊二酸（αKA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入α-酮戊二酸（αKA），和 HRP 標(biāo)記的α-酮戊二酸（αKA）抗原，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的α-酮戊二酸（αKA）的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中α-酮戊二酸（αKA）的含量。

操作步驟

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。