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產品名稱 人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒
適用生物 Homo sapiens (人(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(Mouse)、豬(PoFAine)、兔(Rabbit)、雞(Chiken)..........)
品 牌 商 R&D TSZ(美國)
產品保存 -20℃ [短期內(如兩周)可4℃。
進 口 商 上海恒遠生物科技有限公司
質量認證 ISO9001:2008 ISO13485:2003
檢測范圍 15.63-1000pg/mL 靈敏度 5.8pg/mL
樣本類型 Serum, plasma, tissue homogenates, cell lysates, cell culture supernates and other biological fluids
實驗時長1.5— 4.5h
實驗方法 雙抗夾心法 競爭法 捕獲法 (樣本收集.圖表曲線等信息請點擊鏈接到網(wǎng)站查詢)
適用范圍 此試劑盒僅用于科研實驗,禁用于臨床
規(guī) 格 96T/48T
價 格 請咨詢業(yè)務員 (下載 中文版說明書 英文版說明書)
產品優(yōu)勢 全國包郵、發(fā)貨及時、質量可靠、價格優(yōu)惠、靈敏度高、效果穩(wěn)定、實驗效果好,凡購買公司ELISA試劑盒提供免費代測服務。
用途:
本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。
試驗原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
試劑盒內容及其配制
| 試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48人份酶標板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
| 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
| 標準品:80ug/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進行稀稀 |
| 空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
| 標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
| 生物素標記的抗IgA抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
| 洗滌緩沖液 | 1瓶(60ml) | 1瓶(30ml) | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可完全保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據(jù)當?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
2. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
3. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
4. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
| 80 ug/ml | (6號標準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
| 40 ug/ml | (5號標準品) | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 20 ug/ml | (4號標準品) | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 10 ug/ml | (3號標準品) | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 5.0 ug/ml | (2號標準品) | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 2.5 ug/ml | (1號標準品) | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 0 ug/ml | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2. 洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育15分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
| | 標準品濃度(ug/ml) | | ||||||||||
| A | 80 | 80 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| B | 40 | 40 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| C | 20 | 20 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| D | 10 | 10 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| E | 5.0 | 5.0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| F | 2.5 | 2.5 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| G | 0 | 0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
| H | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
結果分析
以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IgA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IgA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
文檔名稱
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