背景資料 Inherited mutations in BRCA1 and this gene, BRCA2, confer increased lifetime risk of developing breast or ovarian cancer. Both BRCA1 and BRCA2 are involved in maintenance of genome stability, specifically the homologous recombination pathway for double-strand DNA repair. The BRCA2 protein contains several copies of a 70 aa motif called the BRC motif, and these motifs mediate binding to the RAD51 recombinase which functions in DNA repair. BRCA2 is considered a tumor suppressor gene, as tumors with BRCA2 mutations generally exhibit loss of heterozygosity (LOH) of the wild-type allele.
Whole IgG抗體適用于多數(shù)情況,是性價(jià)比高的。Whole IgG是完整的抗體分子,有一個(gè)Fc部分和兩個(gè)與抗原結(jié)合的Fab部分 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc網(wǎng)站)。
F(ab&;rsquo;)2片段抗體是胃蛋白酶消化IgG除去Fc部分,剩下靠二硫鍵連接的結(jié)合抗原的兩個(gè)Fab部分。F(ab&;rsquo;)2片段抗體用在避免抗體與Protain A 或G結(jié)合,或者與有Fc受體的活細(xì)胞結(jié)合。如果一抗是完整的抗體分子,不管二抗是哪種形式都可能結(jié)合Fc受體。
因?yàn)椴煌锓N來源的免疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu),抗一個(gè)物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng),除非事先特殊處理過(如標(biāo)有&;ldquo;min X Hu, Bov&;hellip;Sr Prot&;rdquo; - minimal cross-reactivity to human and bovine serum proteins) ), 經(jīng)過用圓括號(hào)中的物種 (human, bovine)的血清蛋白的吸附處理來降低交叉反應(yīng))。在選擇二抗時(shí),只有在來自兩個(gè)很相近的物種的一抗都存在而需要檢測(cè)其中一種時(shí),才使用針對(duì)其中一種特殊吸附處理過的抗體。這樣的抗體可能不能和所有亞型的IgG都很好的反應(yīng)。比如,在含有內(nèi)源性免疫球蛋白的大鼠的組織樣本中,使用針對(duì)大鼠吸附處理過的anti-mouse IgG來檢測(cè)小鼠的一抗,或者在多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中使用了大鼠的一抗時(shí)。當(dāng)不含有大鼠免疫球蛋白時(shí),好采用沒有針對(duì)大鼠IgG處理過的anti-mouse二抗來檢測(cè)小鼠的一抗。牛血清白蛋白(BSA)和奶粉中可能含有牛IgG。直接針對(duì)牛,山羊,馬和綿羊的二抗會(huì)跟牛IgG反應(yīng)。因此,使用BSA或者奶粉來封閉或者稀釋這些抗體可能導(dǎo)致背景染色明顯增加,以及抗體效價(jià)的降低。這時(shí),推薦使用5%的二抗來源物種的正常血清來封閉。
Anti-IgG,Fc fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應(yīng)。它們通過了ELISA檢測(cè),和(或)針對(duì)Fab片段吸附的測(cè)試。某些情況下,需要額外檢測(cè)和處理來降低和IgM或IgA的交叉反應(yīng),會(huì)被描述為&;ldquo;Anti-IgG, Fc&;gamma;fragment specific&;rdquo;。注意:不是所有anti-IgG, Fc抗體和所有亞型的IgG反應(yīng)能力一致。要找和四種IgG亞類反應(yīng)能力差不多的anti-mouse IgG, Fc&;gamma;抗體的話,應(yīng)當(dāng)選Goat Anti-Mouse IgG (subclasses 1+2a+2b+3), Fc&;gamma;fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)。
Anti-IgG,F(ab&;rsquo;)2 fragment specific和IgG的F(ab&;rsquo;)2/Fab部分反應(yīng)。這類抗體經(jīng)過了ELISA和/或Fc片段的吸附檢測(cè)。因?yàn)楹洼p鏈反應(yīng),它們同時(shí)也和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應(yīng)(如IgM和IgA)。
(min X&;hellip;Sr Prot)這類抗體經(jīng)過了檢測(cè),以及針對(duì)IgG和圓括號(hào)中的物種的血清蛋白的吸附處理。當(dāng)其他物種免疫球蛋白的出現(xiàn)可能導(dǎo)致交叉反應(yīng)時(shí),推薦使用這類抗體。但是,當(dāng)要選擇經(jīng)過針對(duì)相近物種吸附處理的抗體時(shí),要特別注意,因?yàn)樗鼈兡茏R(shí)別的表位數(shù)量大大減小了,可能識(shí)別單抗的能力很弱。這種情況的例子有Anti-Mouse IgG (min X Rat,&;hellip;.Sr Prot), Anti-Rat IgG (min X Mouse, &;hellip;Sr Prot),和 Anti-Ramenian Hamster IgG (min X Mouse, Rat, &;hellip;Sr Prot)。
ML (Multiple Labeling多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)): 有些抗體標(biāo)明了ML,來強(qiáng)調(diào)它們除了可以用于單標(biāo),還可用于多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。